microRNA InstantPCR定量試劑
miRNA是一類大小約為22個堿基的小RNA分子。它們在轉(zhuǎn)錄后階段對基因表達(dá)進行調(diào)控。調(diào)控機制是通過與靶基因的mRNA互補序列結(jié)合，抑制蛋白質(zhì)的翻譯或降低mRNA的穩(wěn)定性，從而抑制靶基因的表達(dá)。miRNA在細(xì)胞的發(fā)育，分化，生長等生命活動中起著重要調(diào)控作用。境象生物miRNA定量產(chǎn)品采用SYBR GreenI實時熒光PCR進行準(zhǔn)確定量。我們提供人，小鼠和大鼠已經(jīng)經(jīng)過實驗驗證的miRNA定量試劑盒。如需對其它物種的miRNA定量，請與我們聯(lián)系，我們提供定制服務(wù)。
產(chǎn)品特點
圖1:hsa-miR-138-5P 9個梯度+NTC擴增曲線、線性關(guān)系、熔解曲線。模板在PCR體系中的量分別為4.3x109-4.3 x10 copies，0 copies（10倍梯度稀釋，10個梯度）。A1和B1由于濃度過高，擴增曲線偏后，Ct值略偏低，A2-A9和B2-B9線性范圍良好，A1-A9，B1-B9熔解曲線全部單峰，兩組NTC均未擴增。
圖2：15個miRNA中有10個可以檢測到最低濃度（43個拷貝）的目標(biāo)miRNA,8-9個梯度的線性關(guān)系良好， NTC未擴增或極少擴增，反轉(zhuǎn)錄引物的本底Ct值全部＞35。
圖3: 在miRNA濃度達(dá)到4x107的情況下，8個相似miRNA用各自對應(yīng)的反轉(zhuǎn)錄引物反轉(zhuǎn)錄后，用不同的PCR引物進行交叉試驗，擴增結(jié)果ct值取2-△ct（交叉組/不交叉組），例：(sl-7a andPCR-7b) / (sl-7a andPCR-7a)。結(jié)果顯示：除Sl-7a和PCR引物7a外，其他引物均沒有交叉擴增。
miRNA定量原理
境象生物采用當(dāng)今基因定量的金標(biāo)準(zhǔn)——實時熒光PCR對miRNA進行定量檢測。根據(jù)需要定量的miRNA個數(shù)，采用兩種方法對miRNA進行反轉(zhuǎn)錄和定量。
獨創(chuàng)的microRNA定量PCR檢測技術(shù)——雙端延長技術(shù)
境象生物獨創(chuàng)的microRNA檢測“雙端延長”技術(shù)，同時延長目標(biāo)microRNA的5’和3’端，并為每個目標(biāo)序列設(shè)計專一性的PCR引物， 5’專一性引物跨越延長序列和目標(biāo)序列銜接部分，3’專一性引物跨越目標(biāo)序列和延長序列銜接部分，從而保證了microRNA檢測的靈敏度、專一性和低本底。
產(chǎn)品組成
qPCR引物- SYBR MasterMix
- 產(chǎn)品使用說明書
提醒：試劑盒不包含反轉(zhuǎn)錄試劑。由于獨特的設(shè)計，境象生物miRNA定量試劑盒不與其它公司反轉(zhuǎn)錄試劑盒兼容，反轉(zhuǎn)錄請使用境象生物miRNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒。
- miRNA 反轉(zhuǎn)錄試劑盒
- SYBR MasterMix